Lingua :
SWEWE Membro :Entra |Registrazione
Cerca
Comunità Encyclopedia |Enciclopedia Risposte |Invia domanda |Conoscenza Vocabolario |Carica conoscenza
domande :DNA inserito in un host utilizzando un plasmide come?
Visitatore (49.149.*.*)[Filippino ]
Categoria :[Tecnologia][Altro]
Devo rispondere [Visitatore (34.227.*.*) | Entra ]

Immagine :
Tipo :[|jpg|gif|jpeg|png|] Byte :[<2000KB]
Lingua :
| Controllare il codice :
Tutto risposte [ 1 ]
[Membro (黑面书生)]risposte [Cinese ]Tempo :2016-02-23
tecniche di clonazione molecolare (preparazione del DNA plasmidi e inserire frammenti di DNA, le reazioni di trasformazione plasmide ricombinante e connessioni)
La clonazione è definita da una molecola avo copiare il gruppo generato e molecola ancestrale identica di molecole avviene a livello genetico chiamato molecolare clonazione Clonazione (clone DNA).
Preparazione di (a) DNA plasmidico
(B) dell'inserto di DNA di Preparazione 1, la reazione di trascrizione inversa 2, DNA polymerase chain reaction (PCR)
(Iii) la reazione legatura
(Iv) la trasformazione plasmide ricombinante

Preparazione di DNA plasmidico
Il plasmide è presente nel cromosoma batterico all'esterno del ciclo chiuso di molecole a doppio filamento di DNA capaci di replicazione autonoma, può dare l'batterica (cellula ospite) fenotipi specifici. Il plasmide non è necessario per la crescita di batteri, ma per la sua codifica alcuni dei batteri benefici nelle enzimi ospiti, in modo che il batterio ospite ha la capacità di resistere fattori sfavorevoli quali la crescita della sua resistenza e simili. Ora trovato diviso principalmente in F plasmide vettore (plasmide), plasmidi R (plasmidi di resistenza), E.coli plasmide (enterotossigena E. coli plasmide). A seconda del numero di copie di plasmidi in un ciclo cellulare può essere diviso in una stringenza plasmide (low copy, copiare una o due volte) e rilassamento (alta copia, copia 10-200 volte). Poiché batterica plasmide incompatibilità spaccata dopo aver lasciato un high copia plasmidi numero, come plasmidi R1 e R2 con due tipi di resistenza appartiene ad una classe, poiché incompatibilità non possono coesistere nello stesso batteri, ma diversi gruppi di plasmidi possono coesistere in un batterio.
Il plasmide presente nel batterio, quindi la preparazione di DNA plasmidico, plasmidi contenenti batteri dovrebbero prima cresciuto fase log, in modo che il plasmide è amplificata in batteri in un mezzo liquido contenente l'antibiotico appropriato.
I batteri sono stati raccolti mediante centrifugazione, i batteri di lisi alcalina, plasmidico e DNA cromosomico batterico denaturate e quindi aggiungere la soluzione, la soluzione viene restituito al pH neutro, in modo che possano plasmide rinaturazione del DNA di conformazione a doppio filamento allo stato naturale, e batteri DNA cromosomico non può o quasi così ancora in refolding stato denaturato, questi DNA cromosomico denaturato e proteina denaturata intrecciate facilmente posizionare centrifugazione, e il DNA plasmidico è ancora presente nella fase acquosa, essiccata su etanolo anidro Shen plasmide DNA Infine, può essere ottenuto per centrifugazione del DNA plasmidico.
Preparazione del frammento (due) DNA inserito
inserto DNA è che vogliamo studiare geni o applicazione, che deve essere clonato o geni espressi. Ottenere un inserto di DNA è il primo passo nel processo di clonazione molecolare. Ci sono diversi metodi per endonucleasi di restrizione separazione diretta,
Screening di librerie, nel metodo di amplificazione in vitro, metodo sintetico, a seguito di trascrizione inversa reazione a catena della polimerasi -DNA esempio per introdurre geni esogeni metodo di inserimento DNA ottenuto.
Cerca

版权申明 | 隐私权政策 | Diritto d'autore @2018 Mondo conoscenza enciclopedica