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Separazione gradiente di densità |
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Centrifugazione in gradiente di densità in un unico separazione dei componenti del campione mediante miscelazione del campione attraverso un gradiente di densità o sedimentazione galleggianti strati di raggiungere. La centrifugazione in gradiente di densità con l'aumento della curvatura. Gradienti di densità possono essere formate, possono essere formati dal processo centrifugo, spesso, il gradiente di densità può essere diviso in: tasso-zona (Rate-30nal), e così via dalla densità (isopicnica) centrifugato.Generalità Principio Una zona lontana dal cuore ad un tasso di campioni misti a spalmare uno strato sottile di liquido nella parte superiore del gradiente, la componente centrifuga del processo a causa diversa "grana" nel gradiente della differenza di velocità di sedimentazione, e in una centrifuga formando un numero di una volta, una prima frazione contenente particelle sinistra "zona". Nel processo centrifugo più verticale ", la separazione in gradiente di densità del campione Simile al componente fase del corpo vivente sono spesso forma simile. Via nella zona di frequenza cardiaca spesso ci facciamo la pendenza non superi la massima densità di campioni liquidi nel gradiente di densità variabile. L'uso di tali componenti biologiche delle differenze nella dimensione del tasso di sedimentazione formazione della diversa scelta di un particolare momento nel tempo in cui tutti sono zona campione puro allargando la distanza tra il più lontano separazione centrifuga di arresto può essere raggiunto questo obiettivo . Frequenza cardiaca è un'area con chiaro è diverso, quindi la centrifugazione densità dipende dal tipo di densità di particelle del campione sottoposto a separazione centrifuga. Campioni di liquido di miscelazione può essere posato in cima al gradiente, gradiente può anche essere posto sotto, e anche gradiente misto. L'ultimo metodo si basa sulla forza centrifuga per formare un gradiente (in quanto la formazione di gradiente) nel processo di formazione di gradiente per campionare ciascuna per le proprie aree di densità monocomponente tale interferenza è ottenuto ricorrendo scopi separazione e purificazione. Per centrifugazione tasso-zonale, la densità massima è generalmente inferiore al gradiente di ciascun componente nella densità del campione, che è, nel processo di risoluzione del campione non è nel campione per formare quest'ultima casa lavandino separato; mentre centrifugazione isopicnica, il gradiente la massima densità iniziale spesso supera la densità di ciascun componente nel campione, l'uso di ogni singolo componente di assestamento o galleggiante le rispettive zone densità come per raggiungere lo scopo della separazione. Formula di espressione Centrifugazione in gradiente di densità sulla teoria di campioni puri di ciascuno degli ingredienti in gradiente tasso di sedimentazione può essere espressa come: V = d2 ÷ 18 × (σ-s) ÷ η × ω2r Dove V è la velocità di sedimentazione del campione alla volta (cm / sec) d: diametro delle particelle del campione (cm), calcoliamo l'ipotesi iniziale, quando le particelle del campione sono sferici. Campioni di particelle non sferiche possono essere corretti in base alla formula di cui sopra. σ: densità delle particelle del campione (g / cm 3) s: il gradiente di densità di densità (g / cm 3) η: coefficiente di viscosità del liquido gradiente di densità (g / cm · sec) ω: velocità angolare dell'asse piega centrifuga (1 / s), ω = 2πN ÷ 60, N: r / min r: ubicazione delle particelle e la distanza tra l'asse di rotazione, il raggio di centrifuga (cm) Quando l' σ> S quando V> 0 il campione lungo la direzione della forza centrifuga insediamento σ <S quando V <0 la direzione della forza centrifuga galleggiante inversa campione σ = S V = 0 cioè quando il campione è fermo decantazione o galleggianti, la "stabilità" in questa posizione Con questa formula può essere ben spiegata in una zona lontana dalla densità di frequenza cardiaca centrifugazione o di altro stabilimento in un singolo campione (o variabile), il comportamento. Selezione del tipo di sfumatura Centrifugazione, i vari componenti della soluzione sono gli stessi nella voce vengano separate e della componente gradiente di molecole del materiale sono la forza centrifuga al fondo della provetta da centrifuga (rifiuto piatta, tipo angolo) o una parete esterna (tubo verticale, vicino tubo verticale, zona voltò, capo flusso continuo) insediamento. Per materiali graduati, se la loro sedimentazione in una velocità di diffusione concentrazione centrifuga maggiore della fase iniziale, si può formare un gradiente di densità continua. Questo è il "gradiente auto-forming" dai principi di base. Possiamo essere isolato materiale campione vengono mescolati insieme e la centrifugazione in gradiente, gradiente di materiale per il processo di formazione della centrifugazione in gradiente di densità, e le varie componenti della deposizione del campione (o variabile), ecc nella loro area di densità. Un altro approccio è una buona gradiente di densità preparato in anticipo, il negozio campione nella provetta da centrifuga (o zona rotore) in una parte (ad esempio tubo di centrifugazione superiore, inferiore o medio), centrifugazione, i vari componenti della deposizione campione (o variabile), ecc nella loro area di densità prima, abbiamo bisogno di raggiungere un "equilibrio" nei risultati. Preformati gradienti possono essere discontinuo (tipo scala), può essere una pendenza costante. La maggior parte del gradiente discontinuo a gradini applicata dal tessuto vegetale o animale omogenati di cellule intere isolate o organuli subcellulari, o per la purificazione di alcuni virus. Un gradiente continuo delle variazioni di densità problemi poiché, per alcune delle varie componenti del campione biologico può essere una combinazione di separato abbassare la risoluzione del sistema municipale è stato ampiamente applicato. |
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